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基因扩增PCR的标本制备区进行临床标本的保存

更新日期:2019年6月10日 大字 小字
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基因扩增PCR检测技术能帮助检疫人员快速发现该病毒。PCR实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域须严格遵循单一方向进行,从试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区单向流动。

基因扩增PCR的标本制备区进行临床标本的保存,核酸提取、贮存及其加入至扩增反应管和测定RNA时cDNA的合成。 要正确使用加样器。
由于在加样操作中可能会发生气溶胶所致的污染,所以应避免在本区内不必要的走动。可通过在本区内设立正压条件避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染,加入待测核酸后,须盖好含反应混合液的反应管。对具有潜在传染危险性的材料,须有明确的样本处理和灭活程序。
用过的加样器吸头须放入专门的消毒容器内。实验室桌椅表面每次工作后都要清洁,实验材料(原始血标本、血清标本、提取中的标本与试剂的混合液等)如出现外溅,则须分别处理并作出记录。 对实验台适当的紫外照射(254nm波长,与工作台面近距离)适合于灭活去污染。
可移动紫外线管灯可用来确保工作后对实验台面的充分照射。 样本处理对核酸扩增有很大影响,须使用有效的核酸提取方法,可在开展临床标本检测前对提取方法进行评价。

用于RNA扩增检测样本制备好以后,应立即进行CDNA合成,因为cDNA链较RNA稳定,保存相对容易。为保证逆转录反应的需要,应在标本制备区设置一个以上的温育装置。
CDNA合成的理想温度依所使用的酶而定,倾向于使用一步法:
即使用在扩增反应缓冲液条件下具有逆转录活性的热稳定的DNA聚合酶进行逆转录,其较cDNA合成后再开盖以调节缓冲液或加入聚合酶进行扩增发生污染的可能性降低。待测RNA的CDNA拷贝须保存在标本制备区,不得在本区对样本进行基因扩增PCR。